Биотехнология Растений

Содержание главы: Разделы учебника: Реклама |
Методы микроклонального размноженияМетоды клонального микроразмножения Существует много методов клонального микроразмножения, а также различных их классификаций. Согласно одной из них, предложенной Мурасиге в 1977 году, процесс можно осуществлять следующими путями: 1. Активация пазушных меристем. 2. Образование адвентивных побегов тканями экспланта. 3. Возникновение адвентивных побегов в каллусе. 4. Индукция соматического эмбриогенеза в клетках экспланта. 5. Соматический эмбриогенез в каллусной ткани. 6. Формирование придаточных эмбриоидов в ткани первичных соматических зародышей (деление первичных эмбриоидов). Н. В. Катаева и Р. Г. Бутенко (1983) выделяют два принципиально различных типа клонального микроразмножения: 1. Активация уже существующих в растении меристем (апекс стебля, пазушные и спящие почки стебля). 2. Индукция возникновения почек или эмбриоидов de novo : а) образование адвентивных побегов непосредственно тканями экспланта; б) индукция соматического эмбриогенеза; в) дифференциация адвентивных почек в первичной и пересадочной каллусной ткани. Основной метод, использующийся при клональном микроразмножении растений - активация развития уже существующих в растении меристем. Он основан на снятии апикального доминирования (рис. 18). Этого можно достичь двумя путями: а) удалением верхушечной меристемы стебля и последующим микрочеренкованием побега in vitro на безгормональной среде; б) добавлением в питательную среду веществ цитокининового типа действия, индуцирующих развитие многочисленных пазушных побегов. Как правило, в качестве цитокининов используют 6-бензиламинопурин (БАП) или 6-фурфуриламинопурин (кинетин) и зеатин. Рис. 18. Схема размножения растений методом активации уже существующих меристем (по А. Р. Родину, Е. А. Калашниковой, 1993): 1 – путем удаления верхушечной меристемы: 2 – добавлением цитокининов в среду (б/г – среда без гормонов, Ц – цитокинин, А – ауксин) Полученные таким образом побеги отделяют от первичного экспланта и вновь самостоятельно культивируют на свежеприготовленной питательной среде, стимулирующей пролиферацию пазушных меристем и возникновение побегов более высоких порядков. Часто в качестве экспланта используют верхушечные или пазушные почки, которые изолируют из побега и помещают на питательную среду с цитокининами. Образующиеся... |